ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΞΗΓΗΣΗ ΤΟ ΤΕΣΤ
Η ελονοσία είναι μια αιμολυτική, εμπύρετη ασθένεια που μεταδίδεται από τα κουνούπια που μολύνει πάνω από 200 εκατομμύρια ανθρώπους και σκοτώνει περισσότερους από 1 εκατομμύριο ανθρώπους ετησίως.Προκαλείται από τέσσερα είδη Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale και P. malariae.Όλα αυτά τα πλασμίδια μολύνουν και καταστρέφουν τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα, προκαλώντας ρίγη, πυρετό, αναιμία και σπληνομεγαλία.Το P. falciparum προκαλεί πιο σοβαρή ασθένεια από τα άλλα πλασμωδιακά είδη και ευθύνεται για τους περισσότερους θανάτους από ελονοσία.Το P. falciparum και το P. vivax είναι τα πιο κοινά παθογόνα, ωστόσο, υπάρχει σημαντική γεωγραφική διαφοροποίηση στην κατανομή των ειδών.
Παραδοσιακά, η ελονοσία διαγιγνώσκεται με την επίδειξη των οργανισμών σε χρωματισμένα με Giemsa παχιά επιχρίσματα περιφερικού αίματος και τα διάφορα είδη πλασμωδίου διακρίνονται από την εμφάνισή τους σε μολυσμένα ερυθροκύτταρα1.Η τεχνική είναι ικανή για ακριβή και αξιόπιστη διάγνωση, αλλά μόνο όταν εκτελείται από έμπειρους μικροσκόπους χρησιμοποιώντας καθορισμένα πρωτόκολλα2, τα οποία αποτελούν σημαντικά εμπόδια για τις απομακρυσμένες και φτωχές περιοχές του κόσμου.
Το κιτ ταχείας δοκιμής αντιγόνου Malaria Pf / Pan έχει αναπτυχθεί για την επίλυση αυτών των εμποδίων.Η δοκιμή χρησιμοποιεί ένα ζεύγος μονοκλωνικών και πολυκλωνικών αντισωμάτων έναντι της ειδικής πρωτεΐνης P. falciparum, της επαναλαμβανόμενης πρωτεΐνης ιστιδίνης II (pHRP-II) και ενός ζεύγους μονοκλωνικών αντισωμάτων κατά της γαλακτικής αφυδρογονάσης του πλασμιδίου (pLDH), μιας πρωτεΐνης που παράγεται από τα τέσσερα είδη plasmodium, επιτρέπει έτσι την ταυτόχρονη ανίχνευση και διαφοροποίηση της μόλυνσης με P. falciparum και ή οποιοδήποτε από τα άλλα τρία πλασμώδια.Μπορεί να πραγματοποιηθεί από μη εκπαιδευμένο ή ελάχιστα εξειδικευμένο προσωπικό, χωρίς εργαστηριακό εξοπλισμό.
ΑΡΧΗ
Το κιτ ταχείας δοκιμής ελονοσίας Pf/ Pan είναι μια χρωματογραφική ανοσοδοκιμασία πλευρικής ροής.Τα συστατικά της ταινίας δοκιμής αποτελούνται από: 1) ένα συζευγμένο επίθεμα χρώματος μπορντό που περιέχει αντίσωμα ποντικού anti-pHRP-II συζευγμένο με κολλοειδές χρυσό (συζευγμένα pHRP II-χρυσό) και αντίσωμα ποντικού anti-pLDH συζευγμένο με κολλοειδές χρυσό (pLDH-gold συζεύξεις),
2) μια λωρίδα μεμβράνης νιτροκυτταρίνης που περιέχει δύο ζώνες δοκιμής (ζώνες Pan και Pv) και μια ζώνη ελέγχου (ζώνη C).Η ταινία Pan είναι προεπικαλυμμένη με μονοκλωνικό αντίσωμα anti-pLDH με το οποίο μπορεί να ανιχνευθεί η μόλυνση με οποιοδήποτε από τα τέσσερα είδη πλασμωδίων, η ζώνη Pf είναι προεπικαλυμμένη με πολυκλωνικά αντισώματα anti-pHRP-II για την ανίχνευση μόλυνσης από Pf, και η ταινία C είναι επικαλυμμένη με κατσίκα αντι-ποντικού IgG.
Κατά τη διάρκεια της δοκιμασίας, ένας επαρκής όγκος του δείγματος αίματος διανέμεται στο φρεάτιο δείγματος (S) της δοκιμαστικής κασέτας, ένα ρυθμιστικό διάλυμα λύσης προστίθεται στο φρεάτιο ρυθμιστικού διαλύματος (Β).Το ρυθμιστικό περιέχει ένα απορρυπαντικό που λύει τα ερυθρά αιμοσφαίρια και απελευθερώνει διάφορα αντιγόνα πλασμωδίου, τα οποία μεταναστεύουν με τριχοειδική δράση κατά μήκος της λωρίδας που διατηρείται στην κασέτα.Το pHRP-II εάν υπάρχει στο δείγμα θα συνδεθεί με τα συζεύγματα pHRP II-χρυσού.Στη συνέχεια, το ανοσοσύμπλεγμα δεσμεύεται στη μεμβράνη από τα προεπικαλυμμένα αντισώματα αντι-pHRPII, σχηματίζοντας μια μπορντώ ζώνη Pf, υποδεικνύοντας ένα θετικό αποτέλεσμα δοκιμής Pf.Το pLDH εάν υπάρχει στο δείγμα θα συνδεθεί με τα συζεύγματα χρυσού pLDH.Στη συνέχεια, το ανοσοσύμπλεγμα δεσμεύεται στη μεμβράνη από το προεπικαλυμμένο αντίσωμα κατά του pLDH, σχηματίζοντας μια μπορντώ ζώνη Pan, υποδεικνύοντας ένα θετικό αποτέλεσμα δοκιμής για πλασμώδιο.Ελλείψει ζώνης Pan, μπορεί να προταθεί ένα θετικό αποτέλεσμα δοκιμής για οποιοδήποτε από τα άλλα τρία πλασμώδια.
Η απουσία οποιωνδήποτε ζωνών δοκιμής (Pan και Pf) υποδηλώνει αρνητικό αποτέλεσμα.Το τεστ περιέχει έναν εσωτερικό μάρτυρα (ζώνη C) που θα πρέπει να εμφανίζει μια μπορντώ ζώνη του ανοσοσυμπλόκου του αντι-ποντικού IgG κατσίκας / IgG ποντικιού (συζεύγματα pHRP-II και pLDH-χρυσού) ανεξάρτητα από την ανάπτυξη χρώματος σε οποιαδήποτε από τις δοκιμαστικές ζώνες .Διαφορετικά, το αποτέλεσμα της δοκιμής δεν είναι έγκυρο και το δείγμα πρέπει να επανεξεταστεί με άλλη συσκευή.
